Apoptotic effect of Bulbine Natalensis and Chlorophytum Comosum in myelogenous Leukemia K562 cell line / Efeito apoptótico da natalensia bulbina e do clorofito comoso na linhagem celular mielogênea da leucemia K562

Abstract Bulbine natalensis and Chorophytum comosum are potential medicinal source for the treatment of cancers. Chronic myeloid leukaemia is a hematopoietic stem cells disorder treated by tyrosine kinase inhibitors but often cause recurrence of the leukaemia after cessation of therapy, hence require alternative treatment. This study determines the anti-cancer effect of leaf, root and bulb methanolic and aqueous extracts of B. natalensis and C. comosum in chronic human myelogenous leukaemia (K562) cell line by MTT, Hoechst bis-benzimide nuclear and annexin V stain assays. The root methanolic extract of B. natalensis and C. comosum showed a high cytotoxicity of 8.6% and 16.7% respectively on the K562 cell line at 1,000 μg/ml concentration. Morphological loss of cell membrane integrity causing degradation of the cell and fragmentation were observed in the root methanolic extract of both plants. A high apoptosis (p < 0.0001) was induced in the K562 cells by both leaf and root extracts of the C. comosum compared to the B. natalensis. This study shows both plants possess apoptotic effect against in vitro myelogenous leukaemia which contributes to the overall anti-cancer properties of B. natalensis and C. comosum to justify future therapeutic applications against chronic myelogenous leukaemia blood cancer.

Resumo Bulbine natalensis Baker e Chorophytum comosum (Thunb.) Jacques são potenciais fontes medicinais para o tratamento de cânceres. A Leucemia Mieloide Crônica (LMC) é um distúrbio das células-tronco hematopoiéticas que é tratado com inibidores da tirosina quinase, mas frequentemente, causa recorrência da leucemia após a interrupção da terapia, portanto, requer um tratamento alternativo. Este estudo determinou o efeito anticancerígeno de extratos metanólicos e aquosos de folha, raiz e bulbo de B. natalensis e C. comosum na linhagem celular de leucemia mieloide humana crônica (K562) por ensaios de MTT, Hoechst bis-benzimida nuclear e anexina V. O extrato metanólico da raiz de B. natalensis e C. comosum apresentou alta citotoxidade de 8,6% e 16,7% respectivamente, na linhagem celular K562 com a concentração de 1,000 μg / ml. Perda morfológica da integridade da membrana celular causando degradação dos núcleos, citoplasma e encolhimento celular foi observada no extrato metanólico da raiz de ambas as plantas. Uma alta apoptose (p <0,0001) foi induzida nas células K562 por extratos de folhas e raízes de C. comosum em comparação com B. natalensis. Este estudo mostrou que ambas as plantas possuem efeito apoptótico contra leucemia mieloide in vitro que contribui para as propriedades anticâncer gerais de B. natalensis e C. comosum para justificar futuras aplicações terapêuticas contra câncer de sangue de LMC.

Apoptotic effect of Bulbine Natalensis and Chlorophytum Comosum in myelogenous Leukemia K562 cell line

Abstract Bulbine natalensis and Chorophytum comosum are potential medicinal source for the treatment of cancers. Chronic myeloid leukaemia is a hematopoietic stem cells disorder treated by tyrosine kinase inhibitors but often cause recurrence of the leukaemia after cessation of therapy, hence require alternative treatment. This study determines the anti-cancer effect of leaf, root and bulb methanolic and aqueous extracts of B. natalensis and C. comosum in chronic human myelogenous leukaemia (K562) cell line by MTT, Hoechst bis-benzimide nuclear and annexin V stain assays. The root methanolic extract of B. natalensis and C. comosum showed a high cytotoxicity of 8.6% and 16.7% respectively on the K562 cell line at 1,000 g/ml concentration. Morphological loss of cell membrane integrity causing degradation of the cell and fragmentation were observed in the root methanolic extract of both plants. A high apoptosis (p 0.0001) was induced in the K562 cells by both leaf and root extracts of the C. comosum compared to the B. natalensis. This study shows both plants possess apoptotic effect against in vitro myelogenous leukaemia which contributes to the overall anti-cancer properties of B. natalensis and C. comosum to justify future therapeutic applications against chronic myelogenous leukaemia blood cancer.

Resumo Bulbine natalensis Baker e Chorophytum comosum (Thunb.) Jacques são potenciais fontes medicinais para o tratamento de cânceres. A Leucemia Mieloide Crônica (LMC) é um distúrbio das células-tronco hematopoiéticas que é tratado com inibidores da tirosina quinase, mas frequentemente, causa recorrência da leucemia após a interrupção da terapia, portanto, requer um tratamento alternativo. Este estudo determinou o efeito anticancerígeno de extratos metanólicos e aquosos de folha, raiz e bulbo de B. natalensis e C. comosum na linhagem celular de leucemia mieloide humana crônica (K562) por ensaios de MTT, Hoechst bis-benzimida nuclear e anexina V. O extrato metanólico da raiz de B. natalensis e C. comosum apresentou alta citotoxidade de 8,6% e 16,7% respectivamente, na linhagem celular K562 com a concentração de 1,000 g / ml. Perda morfológica da integridade da membrana celular causando degradação dos núcleos, citoplasma e encolhimento celular foi observada no extrato metanólico da raiz de ambas as plantas. Uma alta apoptose (p 0,0001) foi induzida nas células K562 por extratos de folhas e raízes de C. comosum em comparação com B. natalensis. Este estudo mostrou que ambas as plantas possuem efeito apoptótico contra leucemia mieloide in vitro que contribui para as propriedades anticâncer gerais de B. natalensis e C. comosum para justificar futuras aplicações terapêuticas contra câncer de sangue de LMC.

Análise da imunoexpressão de BAX e MMP-9 no líquen plano oral / Analysis of BAX and MMP-9 immunoexpression in oral lichen planus

Introdução: O líquen plano oral é uma doença crônica imunologicamente mediada relativamente comum, que acomete a mucosa oral. Clinicamente, o LPO é classificado em seis padrões bem identificados: placa, reticular, bolhoso, atrófico, papular e erosivo.Sendo os mais comuns oos tipos reticulares e erosivos. A ativação dos linfócitos TCD4+ no LPO, pode induzir os ceratinócitos ao processo de apoptose através da respostaimunológica citotóxica. A proteína Bax desempenha uma função relevante para o processo apoptótico. Deste modo, a presente pesquisa consistiu em um estudo transversal retrospectivo, descritivo, quantitativo e comparativo. Objetivo: Avaliar a expressão imuno-histoquímica das proteínas MMP9 e Bax no LPO. Método: Foram utilizados 43 casos de LPO para análise da imunoexpressão de Bax e MMP-9. Os resultados foram analisados através dos testes estatísticos apropriados e serão considerados significativos, valores onde p<0,05. Resultado: A imunoexpressão de MMP9 foi significativamente maior nos ceratinócitos e quando analisados os subtipos de líquen plano oral, não foram observados diferenças estatísticas entre os tipos reticulares e erosivos para as proteínas analisadas. Conclusões: Com essas observações, infere-se que a alteração na expressão das proteínas estudadas sugere um distúrbio nos mecanismos apoptóticos, os quais estão associados às lesões de LPO, e podemos concluir também que as imunoexpressões dessas proteínas não apresentaram diferença, quando relacionada ao tipo clínico reticular ou erosivo. Com esse resultado pode-se contribuir para um maior entendimento sobre os possíveis mecanismos celulares envolvidos na etiopatogenia dessa lesão (AU).

Background: Oral lichen planus is a relatively common immune-mediated chronic disease that affects the oral mucosa. Clinically, OLP is classified into six well-identified patterns: plaque, reticular, bullous, atrophic, papular, and erosive. The most common being the reticular and erosive types. The activation of TCD4+ lymphocytes in the OLP can induce keratinocytes to the process of apoptosis through the cytotoxic immune response. Thus, the present research consisted of a retrospective, descriptive, quantitative and comparative crosssectional study. Objective: to evaluate the immunohistochemical expression of MMP-9 and Bax proteins in OLP. Methods: We used 20 cases of Inflammatory Fibrous Hyperplasia as control. The results were analyzed through the appropriate statistical tests and will be considered significant, values where p<0.05. Results: The immunoexpression of MMP-9 was significantly higher in keratinocytes and when the subtypes of oral lichen planus were analyzed, no statistical differences were observed between the reticular and erosive types for the proteins analyzed. Conclusions: With these observations, it is inferred that the alteration in the expression of the studied proteins suggests a disturbance in the proliferative and apoptotic mechanisms, which are associated with a pathological behavior of the oral mucosa, and consequently with a repercussion on the lesions of OLP, and we can also conclude that the immunoexpression of these proteins had no difference, when related to the reticular or erosive clinical type. This research aims to contribute to a greater understanding of the possible cellular mechanisms involved in the etiopathogenesis of this lesion, thus enabling the understanding of the clinical aspects of the pathology (AU).

Análise imuno-histoquímica da Yes-Associated Protein (YAP) e sua influência sobre a proliferação celular e a apoptose em lesões odontogênicas epiteliais benignas / Immunohistochemical analysis of Yes-Associated Protein (YAP) and its influence on cell proliferation and apoptosis in benign epithelial odontogenic lesions

Introdução: Os cistos e tumores odontogênicos são lesões que apresentam comportamento biológico heterogêneo e patogênese ainda não totalmente esclarecida. A Yes-associated protein (YAP) atua como um regulador transcricional de genes envolvidos na proliferação celular e na apoptose, participando da ativação de vias associadas ao crescimento cístico e à progressão neoplásica. Objetivo: Analisar a expressão imuno-histoquímica da proteína YAP e correlacioná-la com marcadores envolvidos na proliferação celular e na apoptose em lesões odontogênicas epiteliais benignas. Metodologia: A amostra consistiu de 95 casos de lesões odontogênicas - 25 cistos dentígeros (CDs), 30 CO não sindrômicos (COs), 30 AMB convencionais (AMB-Cs) e 10 AMB unicísticos (AMB-Us) -, além de 10 espécimes de folículo dentários (FD). Foi realizada coleta dos dados clinico-demográficos dos casos, bem como análise morfológica para melhor caracterização da amostra. Os cortes histológicos foram submetidos à técnica imuno-histoquímica através da utilização dos anticorpos YAP, ciclina D1, Ki-67 e Bcl-2, e a análise da expressão destes foi realizada quali-quantitativamente, mediante metodologia adaptada. Os dados coletados seguiram para análise descritiva e estatística (p ≤ 0,05). Resultados: Houve discreta predileção por mulheres (n = 55; 57,6%) e por indivíduos na faixa etária dos 21 aos 40 anos (n = 50; 47,6%), sendo a região posterior de mandíbula mais afetada (64%). A análise da imunoexpressão de YAP revelou maiores níveis de expressão em COs, especialmente nas camadas basal e parabasal, seguido dos AMB-Us e AMB-Cs, que demonstraram moderada imunorreatividade, predominantemente nas células periféricas. Além disso, houve diferenças significativas quanto à imunoexpressão de YAP entre os grupos analisados, com existência de correlações positivas e estatisticamente significativas entre YAP e ciclina D1 em CDs e AMB-Us, e entre YAP e Ki-67 em AMB-Us (p < 0,05). Todavia, entre a imunoexpressão YAP e Bcl-2, foi verificada ausência de correlação estatisticamente significativa. Conclusões: A YAP pode exercer influência sobre a proliferação celular do epitélio de cistos e tumores odontogênicos, auxiliando, assim, na progressão das diferentes lesões odontogênicas (AU).

Background: Odontogenic cysts and tumors present heterogeneous biological behavior, and their etiopathogenesis is not fully understood yet. Yes-associated protein (YAP) acts as a transcriptional regulator of genes involved in cell proliferation and apoptosis, activating pathways associated with cystic growth and neoplastic progression. Objective: To analyze the immunohistochemical expression of YAP protein and correlate it with markers involved in cell proliferation and apoptosis in benign epithelial odontogenic lesions. Methods: The sample consisted of 95 cases of odontogenic lesions - 25 dentigerous cysts (DCs), 30 non-syndromic odontogenic keratocyst (OKCs), 30 conventional AMB (C-AMBs), and 10 unicystic AMB (UAMBs) -, in addition to 10 specimens of dental follicles (DF). Clinicodemographic data collection was carried out, as well as morphological analysis for better characterization of the sample. The histological sections were submitted to the immunohistochemical technique using YAP, cyclin D1, Ki-67, and Bcl-2 antibodies, and their immunoexpression analysis was performed qualitatively and quantitatively, through an adapted methodology. The collected data were submitted for descriptive and statistical analysis (p ≤ 0.05). Results: There was a slight predilection for women (n = 55; 57.6%) and individuals aged between 21 and 40 years (n = 50; 47.6%), with the posterior region of the mandible as the most affected site (64%). Analysis of YAP immunoexpression revealed higher expression levels in OKCs, especially in the basal and parabasal layers, followed by U-AMBs and C-AMBs, which showed moderate immunoreactivity, predominantly in peripheral cells. In addition, there were significant differences in YAP immunoexpression between the analyzed groups, with positive and statistically significant correlations between YAP and cyclin D1 in DCs and U-AMBs, and between YAP and Ki-67 in U-AMBs (p < 0.05). However, between YAP and Bcl-2 immunoexpression, there was no statistically significant correlation. Conclusions: YAP may influence on the cell proliferation of odontogenic cysts and tumors epithelium, thus helping with the progression of the different odontogenic lesions (AU) .

Enhancement of Annexin V in response to combination of epigallocatechin gallate and quercetin as a potent arrest the cell cycle of colorectal cancer / Aumento da anexina V em resposta à combinação de galato de epigalocatequina e quercetina como uma potente parada do ciclo celular do câncer colorretal

Abstract Colorectal cancer (CRC) is one of the most common cancers leading to comorbidities and mortalities globally. The rational of current study was to evaluate the combined epigallocatechin gallate and quercetin as a potent antitumor agent as commentary agent for therapeutic protocol. The present study investigated the effect of epigallocatechin Gallate (EGCG) (150mg) and quercetin (200mg) at different proportions on proliferation and induction of apoptosis in human colon cancer cells (HCT-116). Cell growth, colonogenic, Annexin V in addition cell cycle were detected in response to phytomolecules. Data obtained showed that, the colony formation was inhibited significantly in CRC starting from the lowest concentration tested of 10 µg/mL resulting in no colonies as visualized by a phase-contrast microscope. Data showed a significant elevation in the annexin V at 100 µg/mL EGCG(25.85%) and 150 µg/mL quercetin (48.35%). Moreover, cell cycle analysis showed that this combination caused cell cycle arrest at the G1 phase at concentration of 100 µg/mL (72.7%) and 150 µg/mL (75.25%). The combined effect of epigallocatechin Gallate and quercetin exert antiproliferative activity against CRC, it is promising in alternative conventional chemotherapeutic agent.

Resumo O câncer colorretal (CCR) é um dos cânceres mais comuns, levando a comorbidades e mortalidade em todo o mundo. O racional do presente estudo foi avaliar a combinação de galato de epigalocatequina e quercetina como um agente antitumoral potente como agente de comentário para protocolo terapêutico. O presente estudo investigou o efeito de galato de epigalocatequina (EGCG) (150 mg) e quercetina (200 mg) em diferentes proporções na proliferação e indução de apoptose em células de câncer de cólon humano (HCT-116). O crescimento celular, colonogênico, anexina V, além do ciclo celular foram detectados em resposta a fitomoléculas. Os dados obtidos mostraram que a formação de colônias foi inibida significativamente no CRC a partir da concentração mais baixa testada de 10 µg/mL, resultando em nenhuma colônia conforme visualizado por um microscópio de contraste de fase. Os dados mostraram uma elevação significativa na anexina V a 100 µg/mL de EGCG (25,85%) e 150 µg/mL de quercetina (48,35%). Além disso, a análise do ciclo celular mostrou que essa combinação causou parada do ciclo celular na fase G1 na concentração de 100 µg/mL (72,7%) e 150 µg/mL (75,25%). O efeito combinado da epigalocatequina galato e quercetina exerce atividade antiproliferativa contra o CCR, é promissor como agente quimioterápico alternativo convencional.

Comprehensive assessment of markers of apoptosis and cell proliferation during progression of atherosclerosis after surgery in patients with peripheral arterial disease / Avaliação integral de marcadores de apoptose e proliferação celular na progressão da aterosclerose após cirurgia em pacientes com doença arterial periférica

Abstract Background Determination of predictors that can affect development of atherosclerosis progression in the postoperative period is an urgent problem in vascular surgery. Objectives Integrated assessment of markers of apoptosis and cell proliferation in atherosclerotic lesions and their progression after surgery in patients with peripheral arterial diseases. Methods The investigation included 30 patients with stage IIB-III peripheral arterial disease. All patients have undergone open surgical interventions on the arteries of the aorto-iliac and femoral-popliteal segments. During these interventions, intraoperative specimens were obtained from the vascular wall with atherosclerotic lesions. The following values were evaluated: VEGF А165, PDGF BB, and sFas. Samples of normal vascular wall were obtained from post-mortem donors and used as a control group. Results The levels of Bax and p53 were increased (p<0.001) in samples from arterial wall with atherosclerotic plaque, while sFas values were reduced (p<0.001), compared to their levels in control samples. Values of PDGF BB and VEGF A165 were 1.9 and 1.7 times higher in atherosclerotic lesion samples (p=0.001), in comparison with the control group. The levels of p53 and Bax were increased against a background of reduced sFas levels in samples with progression of atherosclerosis compared to their baseline values in samples with atherosclerotic plaque (p<0.05). Conclusions Initially increased values of the Bax marker against a background of reduced sFas values in vascular wall samples from patients with peripheral arterial disease is associated with risk of atherosclerosis progression in the postoperative period.

Resumo Contexto A determinação de preditores que possam influenciar o desenvolvimento da progressão da aterosclerose no período pós-operatório é um problema urgente em cirurgia vascular. Objetivos Realizar uma avaliação integral de marcadores de apoptose e proliferação celular nas lesões ateroscleróticas e sua progressão após cirurgia em pacientes com doenças arteriais periféricas. Métodos A investigação incluiu 30 pacientes com doenças arteriais periféricas de estágio IIB-III. Todos os pacientes foram submetidos a intervenções operatórias abertas nas artérias dos segmentos aorto-ilíaco e fêmoro-poplíteo. Durante a intervenção, foi obtido material intraoperatório da parede vascular com lesões ateroscleróticas. Foram avaliados os seguintes valores: VEGF A165, PDGF BB e sFas. Como grupo controle, amostras de parede vascular normal foram obtidas de doadores post-mortem. Resultados O nível de Bax e p53 (p < 0,001) em amostras de parede arterial com placa aterosclerótica estava elevado em meio a valores reduzidos de sFas (p < 0,001) em comparação ao grupo controle. Os valores de PDGF BB e VEGF A165 foram 1,9 e 1,7 vezes maiores, respectivamente, nas amostras com lesão aterosclerótica (p = 0,001) do que no grupo controle. O nível de Bax e p53 e Bax estava elevado no contexto de nível reduzido de sFas em amostras com progressão da aterosclerose em comparação com seus valores basais em amostras com placa aterosclerótica (p < 0,05). Conclusões Níveis inicialmente elevados do marcador Bax no contexto de valores reduzidos de sFas na parede vascular em pacientes com doença arterial periférica estão associados a risco de progressão da aterosclerose no período pós-operatório.

Comparação de Soluções Cardioplégicas em Cirurgia de Revascularização Miocárdica sobre Mecanismos de Autofagia e Apoptose / Comparison of Cardioplegic Solutions in Coronary Bypass Surgery Over Autophagy and Apoptosis Mechanisms

Resumo Fundamento A doença arterial coronariana (DAC) devido à isquemia miocárdica causa perda permanente de tecido cardíaco. Objetivos Nosso objetivo foi demonstrar o possível dano ao miocárdio em nível molecular através dos mecanismos de autofagia e apoptose em pacientes submetidos à cirurgia de revascularização miocárdica. Métodos Um grupo recebeu uma solução de cardioplegia Custodiol e o outro grupo uma solução de cardioplegia sanguínea. Duas amostras miocárdicas foram coletadas de cada paciente durante a operação, imediatamente antes da parada cardíaca e após a liberação do pinçamento aórtico. Foram avaliadas as expressões de marcadores de autofagia e apoptose. O nível de significância estatística adotado foi de 5%. Resultados A expressão do gene BECLIN foi significativa nos tecidos miocárdicos do grupo CS (p=0,0078). Os níveis de expressão dos genes CASPASE 3, 8 e 9 foram significativamente menores no grupo CC. Os níveis pós-operatórios de TnT foram significativamente diferentes entre os grupos (p=0,0072). As expressões dos genes CASPASE 8 e CASPASE 9 foram semelhantes antes e depois do pinçamento aórtico (p=0,8552, p=0,8891). No grupo CC, os níveis de expressão gênica de CASPASE 3, CASPASE 8 e CASPASE 9 não foram significativamente diferentes em amostras de tecido coletadas após pinçamento aórtico (p=0,7354, p=0,0758, p=0,4128, respectivamente). Conclusões Com nossos achados, acreditamos que as soluções CC e CS não apresentam diferença significativa em termos de proteção miocárdica durante as operações de by-pass.

Abstract Background Coronary artery disease (CAD) due to myocardial ischemia causes permanent loss of heart tissue. Objectives We aimed to demonstrate the possible damage to the myocardium at the molecular level through the mechanisms of autophagy and apoptosis in coronary bypass surgery patients. Methods One group was administered a Custodiol cardioplegia solution, and the other group was administered a Blood cardioplegia solution. Two myocardial samples were collected from each patient during the operation, just before cardiac arrest and after the aortic cross-clamp was released. The expressions of autophagy and apoptosis markers were evaluated. The level of statistical significance adopted was 5%. Results The expression of the BECLIN gene was significant in the myocardial tissues in the BC group (p=0.0078). CASPASE 3, 8, and 9 gene expression levels were significantly lower in the CC group. Postoperative TnT levels were significantly different between the groups (p=0.0072). CASPASE 8 and CASPASE 9 gene expressions were similar before and after aortic cross-clamping (p=0.8552, p=0.8891). In the CC group, CASPASE 3, CASPASE 8, and CASPASE 9 gene expression levels were not found to be significantly different in tissue samples taken after aortic cross-clamping (p=0.7354, p=0.0758, p=0.4128, respectively). Conclusions With our findings, we believe that CC and BC solutions do not have a significant difference in terms of myocardial protection during bypass operations.

In vitro cytotoxicity of curcuminoids against head and neck cancer HNO97 cell line / Citotoxicidade in vitro de curcuminoides contra a linhagem de células HNO97 de câncer de cabeça e pescoço

Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is a malignant tumour of Head and Neck Cancer (HNC). The recent therapeutic approaches used to treat cancer have adverse side effects. The natural agents exhibiting anticancer activities are generally considered to have a robust therapeutic potential. Curcuminoids, one of the major active compounds of the turmeric herb, are used as a therapeutic agent for several diseases including cancer. In this study, the cytotoxicity of curcuminoids was investigated against OSCC cell line HNO97. Our data showed that curcuminoids significantly inhibits the proliferation of HNO97 in a time and dose-dependent manner (IC50=35 μM). Cell cycle analysis demonstrated that curcuminoids increased the percentage of G2/M phase cell populations in the treated groups. Treating HNO97 cells with curcuminoids led to cell shrinking and increased detached cells, which are the typical appearance of apoptotic cells. Moreover, flow cytometry analysis revealed that curcuminoids significantly induced apoptosis in a time-dependent manner. Furthermore, as a response to curcuminoids treatment, comet tails were formed in cell nuclei due to the induction of DNA damage. Curcuminoids treatment reduced the colony formation capacity of HNO97 cells and induced morphological changes. Overall, these findings demonstrate that curcuminoids can in vitro inhibit HNC proliferation and metastasis and induce apoptosis.

O carcinoma de células escamosas oral (OSCC) é um tumor maligno do câncer de cabeça e pescoço (HNC). As recentes abordagens terapêuticas usadas para tratar o câncer têm efeitos colaterais adversos. Os agentes naturais que exibem atividades anticâncer são geralmente considerados como tendo um potencial terapêutico robusto. Curcuminoides, um dos principais compostos ativos da erva cúrcuma, são usados como agente terapêutico para várias doenças, incluindo câncer. Neste estudo, a citotoxicidade dos curcuminoides foi investigada contra a linha de células OSCC HNO97. Nossos dados mostraram que os curcuminoides inibem significativamente a proliferação de HNO97 de forma dependente do tempo e da dose (IC50 = 35 μM). A análise do ciclo celular demonstrou que os curcuminoides aumentaram a porcentagem de populações de células da fase G2 / M nos grupos tratados. O tratamento das células HNO97 com curcuminoides levou ao encolhimento celular e ao aumento das células destacadas, que são a aparência típica das células apoptóticas. Além disso, a análise de citometria de fluxo revelou que os curcuminoides induziram significativamente a apoptose de uma maneira dependente do tempo. Além disso, em resposta ao tratamento com curcuminoides, caudas de cometa foram formadas nos núcleos das células devido à indução de danos ao DNA. O tratamento com curcuminoides reduziu a capacidade de formação de colônias das células HNO97 e induziu alterações morfológicas. No geral, esses achados demonstram que os curcuminoides podem inibir in vitro a proliferação e metástase de HNC e induzir apoptose.

Enhancement of Annexin V in response to combination of epigallocatechin gallate and quercetin as a potent arrest the cell cycle of colorectal cancer / Aumento da anexina V em resposta à combinação de galato de epigalocatequina e quercetina como uma potente parada do ciclo celular do câncer colorretal

Colorectal cancer (CRC) is one of the most common cancers leading to comorbidities and mortalities globally. The rational of current study was to evaluate the combined epigallocatechin gallate and quercetin as a potent antitumor agent as commentary agent for therapeutic protocol. The present study investigated the effect of epigallocatechin Gallate (EGCG) (150mg) and quercetin (200mg) at different proportions on proliferation and induction of apoptosis in human colon cancer cells (HCT-116). Cell growth, colonogenic, Annexin V in addition cell cycle were detected in response to phytomolecules. Data obtained showed that, the colony formation was inhibited significantly in CRC starting from the lowest concentration tested of 10 µg/mL resulting in no colonies as visualized by a phase-contrast microscope. Data showed a significant elevation in the annexin V at 100 µg/mL EGCG(25.85%) and 150 µg/mL quercetin (48.35%). Moreover, cell cycle analysis showed that this combination caused cell cycle arrest at the G1 phase at concentration of 100 µg/mL (72.7%) and 150 µg/mL (75.25%). The combined effect of epigallocatechin Gallate and quercetin exert antiproliferative activity against CRC, it is promising in alternative conventional chemotherapeutic agent.

O câncer colorretal (CCR) é um dos cânceres mais comuns, levando a comorbidades e mortalidade em todo o mundo. O racional do presente estudo foi avaliar a combinação de galato de epigalocatequina e quercetina como um agente antitumoral potente como agente de comentário para protocolo terapêutico. O presente estudo investigou o efeito de galato de epigalocatequina (EGCG) (150 mg) e quercetina (200 mg) em diferentes proporções na proliferação e indução de apoptose em células de câncer de cólon humano (HCT-116). O crescimento celular, colonogênico, anexina V, além do ciclo celular foram detectados em resposta a fitomoléculas. Os dados obtidos mostraram que a formação de colônias foi inibida significativamente no CRC a partir da concentração mais baixa testada de 10 µg/mL, resultando em nenhuma colônia conforme visualizado por um microscópio de contraste de fase. Os dados mostraram uma elevação significativa na anexina V a 100 µg/mL de EGCG (25,85%) e 150 µg/mL de quercetina (48,35%). Além disso, a análise do ciclo celular mostrou que essa combinação causou parada do ciclo celular na fase G1 na concentração de 100 µg/mL (72,7%) e 150 µg/mL (75,25%). O efeito combinado da epigalocatequina galato e quercetina exerce atividade antiproliferativa contra o CCR, é promissor como agente quimioterápico alternativo convencional.

In vitro cytotoxicity of curcuminoids against head and neck cancer HNO97 cell line

Abstract Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is a malignant tumour of Head and Neck Cancer (HNC). The recent therapeutic approaches used to treat cancer have adverse side effects. The natural agents exhibiting anticancer activities are generally considered to have a robust therapeutic potential. Curcuminoids, one of the major active compounds of the turmeric herb, are used as a therapeutic agent for several diseases including cancer. In this study, the cytotoxicity of curcuminoids was investigated against OSCC cell line HNO97. Our data showed that curcuminoids significantly inhibits the proliferation of HNO97 in a time and dose-dependent manner (IC50=35 M). Cell cycle analysis demonstrated that curcuminoids increased the percentage of G2/M phase cell populations in the treated groups. Treating HNO97 cells with curcuminoids led to cell shrinking and increased detached cells, which are the typical appearance of apoptotic cells. Moreover, flow cytometry analysis revealed that curcuminoids significantly induced apoptosis in a time-dependent manner. Furthermore, as a response to curcuminoids treatment, comet tails were formed in cell nuclei due to the induction of DNA damage. Curcuminoids treatment reduced the colony formation capacity of HNO97 cells and induced morphological changes. Overall, these findings demonstrate that curcuminoids can in vitro inhibit HNC proliferation and metastasis and induce apoptosis.

Resumo O carcinoma de células escamosas oral (OSCC) é um tumor maligno do câncer de cabeça e pescoço (HNC). As recentes abordagens terapêuticas usadas para tratar o câncer têm efeitos colaterais adversos. Os agentes naturais que exibem atividades anticâncer são geralmente considerados como tendo um potencial terapêutico robusto. Curcuminoides, um dos principais compostos ativos da erva cúrcuma, são usados como agente terapêutico para várias doenças, incluindo câncer. Neste estudo, a citotoxicidade dos curcuminoides foi investigada contra a linha de células OSCC HNO97. Nossos dados mostraram que os curcuminoides inibem significativamente a proliferação de HNO97 de forma dependente do tempo e da dose (IC50 = 35 M). A análise do ciclo celular demonstrou que os curcuminoides aumentaram a porcentagem de populações de células da fase G2 / M nos grupos tratados. O tratamento das células HNO97 com curcuminoides levou ao encolhimento celular e ao aumento das células destacadas, que são a aparência típica das células apoptóticas. Além disso, a análise de citometria de fluxo revelou que os curcuminoides induziram significativamente a apoptose de uma maneira dependente do tempo. Além disso, em resposta ao tratamento com curcuminoides, caudas de cometa foram formadas nos núcleos das células devido à indução de danos ao DNA. O tratamento com curcuminoides reduziu a capacidade de formação de colônias das células HNO97 e induziu alterações morfológicas. No geral, esses achados demonstram que os curcuminoides podem inibir in vitro a proliferação e metástase de HNC e induzir apoptose.

Enhancement of Annexin V in response to combination of epigallocatechin gallate and quercetin as a potent arrest the cell cycle of colorectal cancer

Abstract Colorectal cancer (CRC) is one of the most common cancers leading to comorbidities and mortalities globally. The rational of current study was to evaluate the combined epigallocatechin gallate and quercetin as a potent antitumor agent as commentary agent for therapeutic protocol. The present study investigated the effect of epigallocatechin Gallate (EGCG) (150mg) and quercetin (200mg) at different proportions on proliferation and induction of apoptosis in human colon cancer cells (HCT-116). Cell growth, colonogenic, Annexin V in addition cell cycle were detected in response to phytomolecules. Data obtained showed that, the colony formation was inhibited significantly in CRC starting from the lowest concentration tested of 10 µg/mL resulting in no colonies as visualized by a phase-contrast microscope. Data showed a significant elevation in the annexin V at 100 µg/mL EGCG(25.85%) and 150 µg/mL quercetin (48.35%). Moreover, cell cycle analysis showed that this combination caused cell cycle arrest at the G1 phase at concentration of 100 µg/mL (72.7%) and 150 µg/mL (75.25%). The combined effect of epigallocatechin Gallate and quercetin exert antiproliferative activity against CRC, it is promising in alternative conventional chemotherapeutic agent.

Resumo O câncer colorretal (CCR) é um dos cânceres mais comuns, levando a comorbidades e mortalidade em todo o mundo. O racional do presente estudo foi avaliar a combinação de galato de epigalocatequina e quercetina como um agente antitumoral potente como agente de comentário para protocolo terapêutico. O presente estudo investigou o efeito de galato de epigalocatequina (EGCG) (150 mg) e quercetina (200 mg) em diferentes proporções na proliferação e indução de apoptose em células de câncer de cólon humano (HCT-116). O crescimento celular, colonogênico, anexina V, além do ciclo celular foram detectados em resposta a fitomoléculas. Os dados obtidos mostraram que a formação de colônias foi inibida significativamente no CRC a partir da concentração mais baixa testada de 10 µg/mL, resultando em nenhuma colônia conforme visualizado por um microscópio de contraste de fase. Os dados mostraram uma elevação significativa na anexina V a 100 µg/mL de EGCG (25,85%) e 150 µg/mL de quercetina (48,35%). Além disso, a análise do ciclo celular mostrou que essa combinação causou parada do ciclo celular na fase G1 na concentração de 100 µg/mL (72,7%) e 150 µg/mL (75,25%). O efeito combinado da epigalocatequina galato e quercetina exerce atividade antiproliferativa contra o CCR, é promissor como agente quimioterápico alternativo convencional.

Dynamic changes in and time sequence of ultraviolet B-induced apoptosis in rat corneal epithelial cells / Alterações dinâmicas na sequência temporal da apoptose induzida por radiação ultravioleta B em células epiteliais da córnea de ratos

ABSTRACT Purpose: To systematically examine the dynamic changes and time sequence in corneal epithelial cell apoptosis after excessive ultraviolet B irradiation. Methods: Ultraviolet B (144 mJ/cm2) was used to irradiate rat corneal epithelial cells for 2 h. Cell morphology was observed on differential interference contrast microscopy, and the numbers of the different kinds of apoptotic cells were counted using the ImageJ software. Cell viability was measured with the 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5- diphenyl-2-H-tetrazolium bromide method. Cell apoptotic rate and loss of mitochondrial membrane potential were detected using flow cytometric analyses. The expression levels of 3 apoptotic genes were measured with real-time quantitative polymerase chain reaction at different time points within 0-24 h after irradiation. Results: After 144-mJ/cm2 ultraviolet B irradiation for 2 h, the expression levels of caspase-8 and Bax were highest at 0 h; furthermore, the mitochondrial membrane potential decreased at 0 h and remained constant for 6 h in a subsequent culture. At 6 h, caspase-3 was activated. The decrease in cell viability and increase in apoptotic rate peaked at 6 h. The caspase-3 expression level decreased within 12-24 h, which led to a decline in apoptotic rate and change in apoptotic stage. Conclusions: The corneal epithelial cells exhibited rapid apoptosis after ultraviolet B irradiation, which was associated with both extrinsic and intrinsic pathways.

RESUMO Objetivos: Explorar sistematicamente as mudanças dinâmicas e a sequência temporal no processo de apoptose de células epiteliais corneanas após excesso de irradiação com ultravioleta B. Métodos: A radiação ultravioleta B (144 mJ/cm2) foi utilizada para irradiar células epiteliais da córnea de rato durante 2h. A morfologia celular foi observada por meio de microscópio de contraste de interferência diferencial, e os números de diferentes tipos de células apoptóticas foram contados e registrados pelo software ImageJ. A viabilidade celular foi medida pelo método brometo de 3- (4, 5-dimetil-2-tiazolil) -2, 5-difenil-2-H-tetrazólio. A taxa apoptótica celular e a perda do potencial da membrana mitocondrial foram detectadas por meio de análises citométricas de fluxo. Os níveis de expressão de três genes apoptóticos foram medidos por reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real em diferentes momentos dentro de 0-24 h após a irradiação. Resultados: Após 144 mJ/cm2 de irradiação com ultravioleta B por 2h, os níveis de expressão de caspase-8 e Bax foram maiores em 0h; o potencial da membrana mitocondrial diminuiu a 0h e permaneceu constante por 6h na cultura subsequente. Às 6h, a caspase-3 foi ativada. A diminuição da viabilidade celular e o aumento da taxa apoptótica atingiu o pico em 6h. A expressão de caspase-3 diminuiu dentro de 12 - 24 h, levando a um declínio na taxa apoptótica e alteração no estágio apoptótico. Conclusões: As células epiteliais da córnea apresentaram uma apoptose rápida após excesso de irradiação com ultravioleta B, e esse processo foi associado tanto à via extrínseca como à via intrínseca.

P2X7 receptor-nitric oxide interaction mediates apoptosis in mouse immortalized mesangial cells exposed to high glucose / A interação do receptor P2X7 com o óxido nítrico medeia a apoptose em células mesangiais imortalizadas de camundongos expostas a níveis elevados de glicose

Abstract Introduction: Diabetes mellitus (DM) is a chronic disease characterized by hyperglycemia that leads to diabetic nephropathy (DN). We showed that P2X7, a purinergic receptor, was highly expressed in DM; however, when oxidative stress was controlled, renal NO recovered, and the activation of this receptor remained significantly reduced. The aim of this study was to assess the influence of NO on the P2X7 and apoptosis in mouse immortalized mesangial cells (MiMC) cultured in high glucose (HG) medium. Methods: MiMCs were cultured with DMEM and exposed to normal glucose (NG), mannitol (MA), or HG. Cell viability was assessed by an automated counter. Supernatants were collected for NO quantification, and proteins were extracted for analysis of NO synthases (iNOS and eNOS), caspase-3, and P2X7. Results: Cell viability remained above 90% in all groups. There was a significant increase in the proliferation of cells in HG compared to MA and NG. NO, iNOS, caspase-3, and P2X7 were significantly increased in HG compared to NG and MA, with no changes in eNOS. We observed that there was a strong and significant correlation between P2X7 and NO. Discussion: The main finding was that the production of NO by iNOS was positively correlated with the increase of P2X7 in MCs under HG conditions, showing that there is a common stimulus between them and that NO interacts with the P2X7 pathway, contributing to apoptosis in experimental DM. These findings could be relevant to studies of therapeutic targets for the prevention and/or treatment of hyperglycemia-induced kidney damage to delay DN progression.

Resumo Introdução: Diabetes mellitus (DM) é uma doença crônica caracterizada por hiperglicemia levando à nefropatia diabética (ND). Mostramos que P2X7, um receptor purinérgico, foi altamente expresso na DM; entretanto, quando o estresse oxidativo foi controlado, o NO renal recuperou-se, e a ativação deste receptor permaneceu significativamente reduzida. Este estudo objetivou avaliar a influência do NO no P2X7 e a apoptose em células mesangiais imortalizadas de camundongos (CMiC) cultivadas em meio de glicose elevada (GE). Métodos: CMiCs foram cultivadas em meio DMEM e expostas à glicose normal (GN), manitol (MA), ou GE. A viabilidade celular foi avaliada por contador automático. Sobrenadantes foram coletados para quantificação de NO, e foram extraídas proteínas para análise de NO sintases (iNOS e eNOS), caspase-3, e P2X7. Resultados: A viabilidade celular permaneceu acima de 90% em todos os grupos. Houve aumento significativo na proliferação de células na GE comparado com MA e GN. NO, iNOS, caspase-3 e P2X7 foram significativamente aumentados na GE comparados com GN e MA, sem alterações na eNOS. Observamos que houve correlação forte e significativa entre P2X7 e NO. Discussão: O principal achado foi que a produção de NO pela iNOS foi positivamente correlacionada com aumento de P2X7 em CMs sob condições de GE, mostrando que existe um estímulo comum entre eles e que o NO interage com a via do P2X7, contribuindo para apoptose na DM experimental. Estes achados podem ser relevantes para estudos de alvos terapêuticos para a prevenção e/ou tratamento de danos renais induzidos por hiperglicemia para retardar a progressão da ND.

Possible roles of sestrin2 in multiple sclerosis and its relationships with clinical outcomes / Possíveis papéis da sestrina2 na esclerose múltipla e suas relações com resultados clínicos

ABSTRACT Background: Characterized by demyelination, inflammation and axonal damage, multiple sclerosis (MS) is one of the most common disorders of central nervous system led by the immune system. There is an urgent and obvious need for biomarkers for the diagnosis and follow-up of MS. Objective: To investigate serum levels of sestrin2 (SESN2), a protein that responds to acute stress, in MS patients. Methods: A total of 85 participants, 40 patients diagnosed previously with relapsing-remitting MS and 45 healthy controls, were included. Serum SESN2 parameters were investigated in blood samples drawn from each participant in the patient and control groups. Results: SESN2 levels were significantly lower in MS patients than in controls (z: -3.06; p=0.002). In the ROC analysis of SESN2, the predictive level for MS was 2.36 ng/mL [sensitivity, 72.50%; specificity, 55.56%; p=0.002; area under the curve (AUC)=0.693]. For the cut-off value in both groups, SESN2 was an independent predictor for MS [Exp (B)=3.977, 95% confidence interval (95%CI) 1.507-10.494 and p=0.013]. Conclusions: The decreased expression of SESN2 may play a role in MS pathogenesis, and SESN2 could be used as a biomarker for MS and as immunotherapeutic agent to treat MS.

RESUMO Antecedentes: Caracterizada por desmielinização, inflamação e dano axonal, a esclerose múltipla (EM) é uma das doenças mais comuns do sistema nervoso central liderada pelo sistema imunológico. Há uma necessidade urgente e óbvia de biomarcadores para o diagnóstico e acompanhamento da EM. Objetivo: Investigar os níveis séricos de sestrina2 (SESN2), uma proteína que responde ao estresse agudo, em pacientes com EM. Métodos: Foram incluídos 85 participantes, 40 pacientes com diagnóstico prévio de EM recorrente-remitente e 45 controles saudáveis. Os parâmetros do SESN2 sérico foram investigados em amostras de sangue coletadas de cada participante nos grupos de paciente e controle. Resultados: os níveis de SESN2 foram significativamente mais baixos em pacientes com EM do que em controles (z: -3,06; p=0,002). Na análise ROC do SESN2, o nível preditivo para MS foi 2,36 ng/mL [sensibilidade, 72,50%; especificidade, 55,56%; p=0,002; área sob a curva (AUC)=0,693]. Para o valor de corte em ambos os grupos, SESN2 foi um preditor independente para MS [Exp (B)=3,977, intervalo de confiança de 95% (95%CI) 1,507-10,494; p=0,013]. Conclusões: A expressão diminuída de SESN2 pode desempenhar um papel na patogênese da EM, e SESN2 poderia ser usado como um biomarcador para EM e como agente imunoterapêutico para o tratamento de EM.

Vitamina C y su acción en células cancerígenas

RESUMEN Introducción: La vitamina C es una sustancia que desde hace ya varios años ha suscitado debate debido a la cantidad de usos que se han demostrado. En algunos casos, las utilidades han ido desde profilaxis y acortamiento de la duración de resfriados, hasta estudios de acción en enfermedades, tales como el cáncer; los mecanismos de acción de esta han sido evaluados en forma de monoterapia o en combinación con quimioterapia para demostrar o descartar su utilidad en el cáncer. Objetivo: Demostrar si los efectos de la vitamina C fueron efectivos y si su uso, solo o en combinación con quimioterapia, es de utilidad. Método: Se realizó una investigación de tipo descriptiva documental, realizada con artículos científicos en el periodo comprendido desde 2016 hasta 2021, con un análisis detallado de los resultados del uso de la vitamina C y su posible efecto sobre los diferentes tipos de cáncer. Fueron buscados en las bases de datos de SciELO, Scopus y Medline. Resultados: La información hallada fue organizada según concentraciones plasmáticas de vitamina C y su acción en células cancerosas, dosis evaluadas de la vitamina C, mecanismos de acción en relación a células cancerígenas, desequilibrio redox, efecto específico en cánceres, vitamina C y cáncer de mama. Conclusiones: En la revisión realizada se evidencia que la vitamina C tiene un efecto benéfico en los cánceres hematopoyéticos, como: leucemia, melanoma, cáncer de mama o ciertos tipos de cáncer colorrectal y que disminuyen los efectos adversos producidos por medicamentos quimioterapéuticos.

ABSTRACT Introduction: Vitamin C is a water-soluble substance that has been in debate since a long time ago due to its wide demonstrated use. In some cases, its usage have ranged from prophylaxis and shortening the duration of colds, to studies of its action in diseases, such as cancer; Its mechanisms of action have been evaluated in the form of monotherapy or in combination with the chemotherapy to demonstrate or rule out its usefulness in cancer. Objective: To demonstrate whether the effects of vitamin C were effective and whether its use, alone or in combination with chemotherapy, is useful. Method: A documentary descriptive research was carried out, supported with scientific articles (period 2016 to 2021) which analyze in detail the results of the use of vitamin C and its possible effect on different types of cancer. Results: The information found was organized according to plasma concentrations of vitamin C, its action on cancer cells, evaluated doses of vitamin C, mechanisms of action in relation to cancer cells, redox imbalance, specific effect on cancers, vitamin C and breast cancer. Conclusions: The review shows that the use of vitamin C has a beneficial effect on hematopoietic cancers, such as leukemia, melanoma, breast cancer or certain types of colorectal cancer, and also reduces the adverse effects produced by chemotherapeutic drugs.

RESUMO Introdução: A vitamina C é uma substância que há vários anos desperta o debate devido ao número de usos que foram demonstrados. Em alguns casos, os benefícios vão desde a profilaxia e redução da duração dos resfriados, até estudos de ação em doenças, como o câncer; os mecanismos de ação deste foram avaliados como monoterapia ou em combinação com quimioterapia para provar ou descartar sua utilidade no câncer. Objetivo: Demonstrar se os efeitos da vitamina C foram eficazes e se seu uso, isoladamente ou em combinação com a quimioterapia, é útil. Método: Foi realizada uma pesquisa documental descritiva, realizada com artigos científicos no período de 2016 a 2021, com análise detalhada dos resultados do uso da vitamina C e seu possível efeito nos diferentes tipos de câncer. Eles foram pesquisados nas bases de dados SciELO, Scopus e Medline. Resultados: As informações encontradas foram organizadas de acordo com as concentrações plasmáticas de vitamina C e sua ação nas células cancerígenas, doses avaliadas de vitamina C, mecanismos de ação em relação às células cancerígenas, desequilíbrio redox, efeito específico sobre cânceres, vitamina C e câncer de mama. Conclusões: Na revisão realizada, fica evidente que a vitamina C tem efeito benéfico sobre os cânceres hematopoiéticos, como: leucemia, melanoma, câncer de mama ou certos tipos de câncer colorretal e que reduz os efeitos adversos produzidos pelos quimioterápicos.

Serum levels of irisin and nesfatin-1 in multiple sclerosis / Níveis séricos de irisina e nesfatin-1 na esclerose múltipla

ABSTRACT Background: Multiple sclerosis (MS) is an inflammatory and neurodegenerative autoimmune chronic neurological disease. Currently, there are no effective serum biomarkers to verify MS diagnosis, to assess disease prognosis, and evaluate response to MS treatment. Objective: The present study is a preliminary assessment of irisin and nesfatin-1 serum levels in patients with relapsing- remitting MS (RRMS). Methods: A total of 86 participants, 42 patients with RRMS diagnosis and 44 healthy controls were included in the study. The serum irisin and nesfatin-1 parameters of the patients and control group members were analyzed. Results: Irisin and nesfatin-1 levels of the RRMS patients were significantly lower than the controls (z: -3.82, p<0.001; z: -4.79, p<0.001, respectively) The cut-off level of irisin is 10.390 (ng/mL) (sensitivity: 84.1%, specificity: 71.4%, AUC: 0.800), and the cut-off level of nestatin-1 is 7.155 (ng/mL) (sensitivity: 68.2%, specificity: 64.3%, AUC: 0.739) in the ROC analysis. For these cut-off levels in the case-control groups, the lower irisin and nesfatin-1 levels are the independent variables for MS patients (OR 9.723, 95%CI 2.884-32.785, p<0.001; OR 3.992, 95%CI 1.336-11.928, p<0.001) respectively. Conclusion: The present study revealed lower irisin and nesfatin-1 levels in patients with RRMS. These findings suggest that the decreased levels of irisin and nesfatin-1 peptides may contribute to MS pathogenesis such as inflammation, oxidative stress, and apoptosis in MS, leading to demyelination, axonal damage with neuronal loss, and gliosis.

RESUMO Antecedentes: A esclerose múltipla (EM) é uma doença neurológica crônica autoimune inflamatória e neurodegenerativa. Atualmente, não há biomarcadores séricos eficazes para verificar o diagnóstico de EM, para avaliar o prognóstico da doença e avaliar a resposta ao tratamento de EM. Objetivo: O presente estudo é uma avaliação preliminar dos níveis séricos de irisina e nesfatina-1 em pacientes com EM recorrente-remitente (EMRR). Métodos: Um total de 86 participantes, 42 pacientes com diagnóstico de EMRR e 44 controles saudáveis, foram incluídos no estudo. Os parâmetros séricos de irisina e nesfatina-1 dos pacientes e membros do grupo controle foram analisados. Resultados: Os níveis de irisina e nesfatina-1 dos pacientes com EMRR foram significativamente mais baixos do que os dos controles (z: -3,82, p <0,001; z: -4,79, p <0,001, respectivamente). O nível de corte de irisina é 10,390 (ng/mL) (sensibilidade: 84,1%, especificidade: 71,4%, AUC: 0,800), e o nível de corte de nestatina-1 é 7,155 (ng/mL) (sensibilidade: 68,2%, especificidade: 64,3%, AUC: 0,739) na análise ROC. Para esses níveis de corte nos grupos de caso-controle, os níveis mais baixos de irisina e nesfatina-1 são as variáveis independentes para pacientes com EM (OR 9,723, IC95% 2,884-32,785, p <0,001; OR 3,992, IC95% 1,336-11,928, p <0,001) respectivamente. Conclusão: O presente estudo revelou níveis mais baixos de irisina e nesfatina-1 em pacientes com EMRR. Esses achados sugerem que os níveis diminuídos de peptídeos irisina e nesfatina-1 podem contribuir para a patogênese da EM, como inflamação, estresse oxidativo e apoptose na EM, levando à desmielinização, dano axonal com perda neuronal e gliose.

Efeitos do citrato de clomifeno, letrozol e estradiol sobre apoptose em células do cumulus oophorus humano / Effects of clomiphene citrate, letrozole and estradiol on apoptosis in human cumulus oophorus cells

Citrato de clomifeno (CC) e letrozol (LE) são indutores de ovulação que, apesar das altas taxas de ovulação confirmada, atingem baixas taxas de gravidez. Este estudo teve como objetivo investigar os efeitos de CC e LE in vitro, isoladamente ou em combinação com estradiol (E), na apoptose de células do cumulus oophorus humano. Realizamos um estudo prospectivo controlado utilizando culturas primárias de células do cumulus de pacientes submetidas à fertilização in vitro (n=22). A coloração com Giemsa e a imunocitoquímica para alfa-inibina foram utilizadas para avaliar a pureza e a morfologia da cultura celular. A viabilidade celular foi avaliada pelo ensaio MTT, o ciclo celular por citometria de fluxo e a expressão gênica de Caspase-3, Bax e Superóxido dismutase 2 (SOD-2) e S26 por reação em cadeia de polimerase (PCR) em tempo real. As células foram tratadas por 24 horas em 5 grupos de tratamento: CC, CC + E, LE, LE + E e controle. Nenhum dos tratamentos afetou a viabilidade celular, mas o LE reduziu a porcentagem média de células na fase S em relação ao controle (24,79 versus 21,70, p=0,0014). O tratamento com CC aumentou a expressão gênica de Bax (4 vezes) e SOD-2 (2 vezes), que foi revertida quando adicionado E à cultura. A expressão de SOD-2 aumentou em células tratadas com LE quando comparado ao controle (4 vezes), que foi também revertida por adição de E. Estes achados sugerem que CC e LE não afetam significativamente a viabilidade das células do cumulus humana. Porém, houve modulação na expressão de genes envolvidos na apoptose por essas drogas isoladamente e em associação com E, sugerindo que CC e LE podem ter efeitos diretos nas células do cumulus além de seus mecanismos de ação conhecidos.

Clomiphene citrate (CC) and letrozole (LE) are ovulatory stimulants that, despite high ovulation rates, achieve low pregnancy rates. This study aimed to investigate the in vitro effects of CC and LE, alone or in combination with estradiol (E), on apoptosis in human cumulus cells. We performed a controlled prospective study using primary cumulus cell cultures from patients undergoing in vitro fertilization (n=22). Giemsa stain and alpha-inhibin immunocytochemistry was used to assess cell culture purity and morphology. Cell viability was evaluated by MTT assay, cell cycle status by flow cytometry, and Caspase-3, Bax and superoxide dismutase 2 (SOD-2), and S26 gene expression by real-time polymerase chain reaction (qPCR). Cells were treated for 24 hours in 5 conditioned media: CC, CC + E, LE, LE + E and control. None of the treatments affected cell viability, but LE reduced the mean percentage of cells in the S phase compared to control (24.79 versus 21.70, p=0.0014). CC treatment increased mRNA expression of Bax (4 fold) and SOD-2 (2 fold), which was reversed by co-treatment with E. SOD-2 expression increased in cells treated with LE compared to control (4 fold), which was also reversed by E. These findings suggest that CC and LE do not significantly affect the viability of human cumulus cells. Still, the expression of genes involved in apoptosis was modulated by these drugs alone and in association with E, suggesting that CC and LE may have direct effects on cumulus cells beyond their known mechanisms of action.

Presence of Civatte Bodies in an oral lichen planus incisional biopsy sample / Presença de corpos de Civatte em uma amostra de biópsia incisional de líquen plano oral

ABSTRACT Objective: Civatte bodies are colloid bodies of apoptotic keratinocytes located at the dermoepidermal junction and are common in several dermatoses, including lichen planus lesions. The present study aimed to determine the presence of Civatte bodies in a sample of incisional biopsies obtained from patients diagnosed with oral lichen planus. Methods: A retrospective cross-sectional study, carried out with 34 slides stained with hematoxylin-eosin from the archive of an Oral Pathology Laboratory of a Higher Education Institution. The sample obtained was classified into white and red lesions from the available clinical data. Histological analyses were performed under a light microscope, with 10x and 40x objectives, identifying the presence or absence of Civatte bodies. Results: Colloid bodies were present in 73.5% the total sample studied and in 74.2% white lesions. Conclusion: The Civatte bodies were frequent in all samples analysed and should thus be considered a criterion for histological diagnosis in lesions of Oral Lichen Planus.

RESUMO Objetivo: Corpos de Civatte são corpos coloidais de queratinócitos apoptóticos localizados na junção dermoepidérmica e que são frequentes em várias dermatoses, inclusive as lesões de líquen plano. O objetivo do presente trabalho foi determinar a presença de corpos de Civatte em uma amostra de biópsias incisionais obtidas a partir de pacientes com diagnóstico de líquen plano oral (LPO). Métodos: Tratou-se de um estudo transversal retrospectivo, realizado com 34 casos cujas lâminas foram coradas pela hematoxilina-eosina, pertencentes ao arquivo de um Laboratório de Patologia Oral de Instituição de Ensino Superior. A amostra obtida foi classificada em lesões brancas e vermelhas a partir dos dados clínicos disponíveis. As análises histológicas foram realizadas em microscópio de luz, nas objetivas de 10x e 40x, com identificação dos corpos de Civatte como presentes ou ausentes. Resultados: Os corpos colóides estavam presentes em 73,5% da amostra total estudada e em 74,2% das lesões brancas. Conclusão: Os corpos de Civatte foram frequentes em todas as amostras analisadas e não devem ser negligenciados como critério de diagnóstico histopatológico em lesões de LPO.

Disfunción en la plasminogénesis en paciente críticamente enfermo con infección polimicrobiana asociado a deficiencia de glicoproteínas / Plasminogenesis disfunction in critical ilness patient with polimicrobial infection associated glycoproteins deficiency / Disfunção da plasminogênese em paciente crítico com infecção polimicrobiana associada a deficiência de glicoproteínas

Resumen: Presentamos el caso clínico de una paciente de 59 años de edad con sepsis por neumonía polimicrobiana con aislamientos virales condicionantes de sobreinfección bacteriana y trombosis. Su escanografía de tórax reportó colapsos posterobasales con atelectasias e infiltrados intersticiales reticulares; evolucionó con deterioro cognitivo relacionado con enfermedad cerebro vascular multiinfarto documentado por tomografía cerebral con emisión de fotón único por medicina nuclear debido a estudios de cráneo normales; ante la evolución neurológica se realizaron estudios de extensión con ecocardiograma Doppler dúplex color transtorácico, el cual fue normal, así como estudio contrastado de cuatro vasos de cuello, Holter de ritmo eléctrico y perfil metabólico completo también normales. Realizamos una revisión en la literatura con miras a brindar entendimiento y evidenciar la relación directa entre síndromes sépticos e infecciones virales con diferentes estados de hipercoagulabilidad, inflamación y apoptosis.

Abstract: We present the clinical case of a 59-year-old patient with sepsis due to polymicrobial pneumonia with viral isolates conditioning bacterial infection and thrombosis. His chest scannography reported basals collapses with atelectasis and reticular interstitial infiltrates; Evolved with cognitive impairment related to multi-infarction vascular brain disease documented by single-photon emission brain tomography by nuclear medicine due to normal scannographies studies; Given the neurological evolution, extension studies were carried with transthoracic duplex Doppler echocardiogram which was normal, as well as a contrasted study of four neck vessels, electrical rhythm holter and complete metabolic profile also normal. We conducted a review in the literature with a view to providing understanding and evidence of the direct relationship between septic syndromes and viral infections with different states of hypercoagulability, inflammation and apoptosis.

Resumo: Apresentamos o caso clínico de um paciente de 59 anos com sepse por pneumonia polimicrobiana com isolados virais condicionando superinfecção bacteriana e trombose. Sua cintilografia de tórax relatou colapsos póstero-basais com atelectasia e infiltrados intersticiais reticulares; Evoluiu com deterioração cognitiva relacionada à doença cerebrovascular multi-infarto documentada por tomografia cerebral com emissão de fóton único pela medicina nuclear devido a estudos de crânio normais; dada a evolução neurológica, realizaram-se estudos de extensão com ecocardiograma Doppler colorido transtorácico duplex, que foi normal, bem como estudo contrastado de quatro vasos do pescoço, Holter de ritmo elétrico e perfil metabólico completo, também normais. Realizamos uma revisão da literatura com o objetivo de compreender e evidenciar a relação direta entre síndromes sépticas e infecções virais com diferentes estados de hipercoagulabilidade, inflamação e apoptose.